Saimniekšūnu atlikušo DNS paraugu sagatavošanas programma
May 21, 2021
Atstāj ziņu
Rekombinantās olbaltumvielu zāles, antivielu zāles, vakcīnas un citus produktus bioloģiskajos produktos izsaka un ražo ar nepārtrauktām šūnu līnijām. Lai arī tie ir pakļauti stingriem attīrīšanas procesiem, produktos joprojām var būt atlikušie saimniekšūnu DNS fragmenti (rDNS).
Šīs rDNS var ietekmēt receptora galveno gēnu darbību, tādējādi radot infekcijas vai audzēja risku.
Tāpēc ir īpaši svarīgi, kā efektīvi un stabili iegūt parauga rDNS. Pašlaik galvenokārt ir šādas metodes:
| Metodes | Priekšrocība | Trūkums |
| Fenols / hloroforms | Augsta DNS tīrība un augsts saturs | Laikietilpīgi, apgrūtinoši soļi un toksiski |
| Nātrija jodīda nokrišņi | viegli izmantot | Laikietilpīgs un nestabils DNS saturs |
| Kolonnas metode | Vienkārša un ļoti tīra | Laikietilpīgs un grūti automatizējams |
| Magnētiskās lodītes metode | Vienkāršu, ļoti tīru, var automatizēt | - |
 |
Šī ārstēšanas shēma ir balstīta uz magnētiskās lodītes metodes principu un tiek izmantota bioloģisko produktu rDNS pirmapstrādes sistēmā, kas var realizēt efektīvu, vienkāršu un automatizētu pirmapstrādes sistēmu.
Automātiskais nukleīnskābes ekstrakcijas instruments SCIENTZ ir aprīkots ar plaši pazīstamu saimniekšūnu atlikuma DNS paraugu iepriekšējas apstrādes komplektu (magnētiskās lodītes metode), un dažādu paraugu atgūšanas ātrums ir stabils līdz pat 80%, kas var stabili un efektīvi kontrolēt saimniekšūnas DNS atlikušais saturs dažādos bioloģiskos produktos
Eksperimentālā programma
Eksperimentālie materiāli: automātiskais nukleīnskābes ekstrakcijas instruments (NP-2032), fluorescējošs kvantitatīvs PCR instruments (LightCycler480), saimniekšūnu atlikuma DNS parauga pirmapstrādes komplekts (magnētiskās lodītes metode), CAR / TCR gēnu kopiju skaita noteikšanas komplekts (multiplās PCR - fluorescences zondes metode )
Eksperimentālie paraugi: retrovīrusu paraugi, CAR-T šūnu paraugi, negatīva kontrole
Eksperimentālās darbības:
Uzraudzībai.
Eksperimenta sagatavošana-parauga sagatavošana-ekstrakcijas sagatavošana-programmas sākums-kopējā atlikuma satura noteikšana
Piezīmes: Instruments darbojas apmēram 30 minūtes
Eksperimenta rezultāti:
| Parauga nosaukums | MeanCp | MeanConc | Atgūtā summa | Skalārs | Atgūšanas ātrums |
| Negatīva kontrole | 36.43 | 0.00 | - | - | - |
| Negatīvā vadība + (pārnēsājama) | 18.67 | 86.62 | 8662.15 | 9707.85 | 89% |
| Negatīva kontrole | 18.72 | 53.47 | 8020.723657 | 9868.821045 | 81% |
| Vīrusa paraugs + | 19.15 | 63.10 | 8194.27 | 9707.85 | 84% |
| Šūnas paraugs | 20.21 | 32.93 | 2811.241943 | 2740.516576 | 102% |
Eksperimenta rezultāti:
Dažādu paraugu automatizētai apstrādei ir stabili un efektīvi rezultāti;
Partijas apstrādes automatizācijas efektivitāte ir augstāka nekā manuālās ekstrakcijas efektivitāte;
Tas atbilst jaunā USP atgūšanas līmeņa prasībām; tas var būt labs palīgs rDNS noteikšanas iepriekšējai apstrādei bioloģiskajos produktos.
Produkta displejs:
 |